促甲状腺激素受体胞外段基因突变与Graves病的相关研究

２００２年４月第１８卷第２期Ｃｈｉｎ　Ｊ　ＥｎｄｏｃＩｉｎｏｌ　Ｍｅｔａ］Ｊ．Ａｐ脚２哩，！　】　．　３　用　。　ｅｎｄｏｔｈｅｌＩ刖ｎｉｔｒｉｃ咖ｄｅ　ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ　Ｉｎ　Ｈ４４１　ｈｕｍａｎ　ａｉ￣ａｙ　ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　本研究以ＦＳＨ、ＬＨ、Ｅ　和Ｔ为检测对象．探讨儿童哮喘　ｃｅｉｌｓ．Ａｍ　Ｊ　ＲｅｓｐＪｒ　Ｃｅｌｔ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏ］．１９９９．２０：６５８４５６６　及治疗时性激素的水平和作用。研究结果表明ＦＳＨ、ＬＨ在　３　Ｍａｙｅｒｓ　ＪＲ．Ｓｈｅｅｎ　ＣＢ　Ｓｈｏｕｌｄ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔＭ　ｅｓｔｒｏｇｅｎ　ｂｅ　ｕｓ　删　ｍｅｍｉｄ—ｓｐａｒｉｎｇ　ａｇｅｎｔｓ　ｉｎ　ａｓｔｈｍａｔｉｃ　ｗｏｍｂ？Ｃｈｅｓｔ．１９９４．１０６：３１８　正常组、哮喘组和长期吸人治疗组之间差异无显著性，提示　３ｌ９　哮喘和长期吸人糖皮质激素治疗对患儿促性腺激素的分泌　４　Ｈ脚曲ｏＮ．Ｔ目　ｄａＮ，Ｍａｅｓａｋｏ　ＫＩ．ｅｔ　ＥｆｆｅＩＺｔ　０ｆ　８ｅｘ　ｈｏ￣ｎｍ　０ｎ　影响较小。哮喘组、长期吸人组与正常组比较Ｔ降低（Ｐ＜　ｅｏｓｈｔｏｐｈｉｔｉｃ　ｉⅡｎａｍＩｕ　＿彻ｉｎ　ｎａｓａｌ　ｔｌｌｌＪＧ＇０６￣　．６ｌｌｅｒｇｙ　Ａｓｔｍｈａ　Ｐｒｏｃ．　０　０５），可能与皮质激素代谢紊乱和肾上腺皮质功能抑制有　１９９８．１９：２６３－２６９　关。长期吸人组分别与正常对照组和哮喘组相比较，Ｅ。明　５　Ｔａｎ　ＫＳ，Ｍｅ，Ｆａｒｌａｎｅ　ＬＣ，Ｌｉｐｗｏｒｔｈ　ＢＪ．Ｍｏｄｕｌａｆｉｍｌ　０ｆ　ａｉ￣＇ａｙ　ｒ朗ｃ【ｌ＂计　ｍｄ　ｐｅａｋ　ｆｌｏ￣＇一日ｂＩＩＩ¨ｉｎ　ａｓｔｈｍａｔｉｃｓ　ｒｅｃｅｉｖｉｎｇ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒａｃｅｐｔｉｖｅ　显减少（Ｐ＜０　０５），其差别可能与长期吸人糖皮质激素对肾　ｐｉｌｌ　Ａｍ　Ｊ　Ｒ￣ｐｉｒ　Ｃｒｉｔ　Ｃａｉｅ　Ｍｅｄ．１９９７，１５５　１２７３一【２７７　上腺功能的抑制以及雌激素生成减少等因素有关　６　Ｔｒｏｉ￣Ｉ｛Ｊ．Ｓｐｅｉｚｅｒ　ＦＥ，Ｗｉｌｅｔｔ　ＷＣ．ｅｔ　Ｍｅｎｏｐａｕｓｅ．　本研究提示儿童在哮喘和治疗的过程中存在有性激素　１ｍｓｔｍｖｎｏｐａｕｓａｌ　ｅｓｔｒｏｇｅｎ　ｐｒｅｌｍｓａｆｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｉｓｋ　ｏｆ　ａｄｔｄｔ－ｏｎｓｅｌ　的变化，可能主要通过影响肾上腺皮质功能而影响血清性激　ａｓｔｈｍａ．Ａｍ　Ｊ　Ｒｅｓｐｉｒ　Ｇｒｉｔ　Ｃａｒｅ　Ｍｅｄ．１９９５．Ｉ５２　１　８３—１８９　素的水平；这种变化对哮喘的影响有待于进一步研究。　７韩雄．许贤豪，方树友性激素与免疫应答的研究进晨中华内　科杂志，１９９８，３７：３４７－３４８　参考文献　８　Ｃ￣ｌｔｒｅｒａｓ　ＬＮ．Ｍａｓｌｌ６　ＡＭ．Ｄｍａｎａ　ＭＭ，ｇｔ　ａＩ＿Ｇ］ｕｃｏｃｏａｉ￣ｉｄｓ：ｔｈｅｉｒ　ｍ］ｅ　０　￣ｏｔｒａｄａ］ｆａｌｎｃｔＪｏｎ皿ｄ　ＬＨ　ｓｅｃｍｔｌｏｎ．Ｍｉｎｅ￣ａ　Ｅｎｄｏｃｒｍｏｌ　ｌ胨育智．俞善昌．苗宗祈，等整理．儿童哮喘防治常规（试行）．　１９９６．２１：４３　中华儿科杂志．１９９８．１２：７４７－７５ｌ＿　（收稿２０００／）２　８ｊ　２　Ｋｉｔｓｃｈ　ＥＡ．Ｙｕｈａｎｔｍ　ＩＳ．Ｃｈｅｒｔ　Ｚ，ｇｔ　ａｌ　Ｅｓｔｒｏｇｅｎ　ａｃｕｔｅｌｙ　ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ　促甲状腺激素受体胞外段基因突变与　Ｇｒａｖｅｓ病　的相关研究　戴亚丽施秉银薛明战李雪萍高慧何岚王毅马秀萍袁育康　Ｇｒａｖｅｓ病（ＧＤ）是一种器官特异性自身免疫性甲状腺疾　２．方法：（１）总ＲＮＡ的提取：用Ｔｒ；ｚｏｌ试剂盒（Ｇｉｂｃｏ公　病，患者体内存在着多种自身抗体，ＧＤ的发病中以促甲状腺　司）从甲状腺组织中提取总ＲＮＡ。（２）反转录：用Ｍ—ＭＬＶ反　激素受体抗体（ＴＲＡｂ）最为重要，而ＴＲＡｂ所对应的抗原是　转录酶（Ｇｉｂｃ￣公司）将ＲＮＡ反转录为ｃＤＮＡ。（３）ＰＣＲ：用４　ＴＳＨ受体（ＴＳＨＲ）。国外有学者报道ＧＤ的发生与ＴＳＨＲ基　对套叠引物将ＴＳＨＲ胞外段基因分别扩增为４个片段。ＰＣＲ　因突变有关，但另有学者认为与ＴＳＨＲ基因突变无关。本研　反应体积５０　，４个片段均先９４２２预变性５　ｍｌｎ，继之３５个　究探讨中国人Ｇｒａｖｅｓ病的发病与ＴＳＨＲ基因突变之间的关　循环，每个循环９４。ｃ变性５０　８，退火（退火温度见表１）４５　Ｓ，　系。　７２。ｃ延伸１　ｍｉｎ，末敬循环后延伸７　ｒａｉｎ结束。（４）ＳＳＣＰ：将　一、对象和方法　ＰＣＲ产物加上样液后沸水浴１０　ｒａｉｎ．立即置于冰水浴５　ｍｉｎ，　１．对象：病例组：ＧＤ患者５０例（男５，女４５），年龄１９～　之后上样于聚丙烯酰胺凝胶（ＳＳＣＰ参数见表２），用１×　５７岁　有典型的ＧＤ症状和体征，血清ＴＬ、ＴＬ、ＦＴ　、ＦＴ　升　高，ＴＳＨ降低，均经病理证实。对照组为非自身免疫性甲状　表１　ＰＣＲ所用引物序列、扩增片段大小及退火温度　腺病患者，共１９倒（男１，女１８），包括甲状腺腺瘤周围正常　扩增产　引物序列　片　退　度　组织５例，甲状腺腺癌周围正常组织４例，甲状腺肿１Ｏ例。　物序号　（５　）　其中４２倒ＧＤ患者标本经甲状腺粗针穿刺活检获取，余均　来自手术标本。　基金项目：国家自然科学基金资助项目（３９５７０６７４）　作者单位：７１００６１西安交通大学第一医院内分泌科（戴亚丽、施　秉银、高慧、何岚、王毅、马秀萍、袁育康），妇幼系（薛晴战）；陕西医　学高等专科学校（李雪萍）；第一作者现在深圳市中心医院内分泌科　维普资讯 http://www.cqvip.com

±　出　堂丛童必　兰！　塑　查塑　ｎ　！Ｌ　ＡｐｒｉＩ　ｌ　Ｉ　ｂ　裹２　ＳＳＣＰ参数　Ｎａｇａｙａｍａ等　和Ｎｉｓｒａｈｉ等　所报道的ＴＳＨＲ的结构．返两　种序歹　在正常人中均存在．这两种碱基所在的密码子：Ａ＾Ｔ、　ＡＡＣ）均编码１８７位的天冬酰胺，与Ｂａｈｎ等　的研究结果一　致．Ｂａｈｎ等在Ｇｒａｖｅｓ眼病和正常人中均发现了ＴＳＨＲ　１８７位　氪基酸第三位点（６６Ｉ位　Ｊ碱基存在Ｔ／Ｃ的多态性　近来越来越多的研究表明．ＧＤ的发病与ＴＳＨＲ基因窝　变之间并无关联，也与ＴＳｔｔ受体的多态性无关　Ｋａｃｚｕｒ　等　报道在正常个体中有１２％可以检测到Ｐｒｏ５２　ｒｈｒ突变．　ＴＢＥ缓冲液．电泳５—６小时，玲水循环仪恒定温度，０　２％硝　他们认为这种突变可能不是ＧＤ的病囡　Ｓｉｍａｎａｎｅｎ等　在　酸银染色观察结果。（５）ＤＮＡ测序：将ＳＳＣＰ筛查有异常的　１６０例ＧＤ病人和１４０例健康对照者中筛查ＴＳＩｔＲ第．外显　标本再次扩增后，ＰＣＲ产物用ＤＮＡ纯化试剂盒纯化回收，用　子基因的突变情况．发现ＧＤ组和对照组中均有Ａｓｐ３６Ｉｔｉｓ和　相同的引物在ＡＢＩ　Ｐｒｉｓｍ　３７７型自动测序仪上进行ＤＮＡ测　ｐｒｏ５２Ｔｈｒ这两种碱基的变异．ＴＳＨＲ等位基因的频率在州组　序。　中差异无显著性，因此作者认为这是基因的两种多态性．在　二　结果　人群中发生的频率较高。Ａｈｍａｄ等认为艘第１外显亍鳊鹊　Ｉ　ＳＳＣＰ分析：在５０例ＧＤ及】９例对照中，第二片段有　的　Ｉ＇ＳＨＲ胞外段的多态性或突变与ＣＤ的发病无关．另有报　¨例ＧＤ及２例对照发生了泳动变位，这１３例均表现为在　遭认为ＧＤ病＾的ＴＳＨＲ基因结构无明显异常　同一位置多一条单链带　余未发现带型异常。　从现有资料及本研究结果可以看出，ＧＤ患者ＴＳ２ＨＲ基　２　ＤＮＡ测序结果：将第二片段发生泳动变位的ＧＤ及对　因并无突变．但存在着基因的多态眭　这种多志性与正常人　照　未发生泳动变位的ＧＤ及对照各取１例进行测序　结果　比较差异并无显著性，因此认为ＣＤ的发病与　ＰＳＨＲ的摹网　显示：带型未发生异常的其ＴＳＨＲ胞外段基因６６１位　的碱　突变无关　基为Ｔ，带型发生异常的其ＴＳＨＲ胞外段基因６６１位点的碱　基为Ｃ，这两种碱基所对应的密码子分别为Ａ盯、Ａ　，均编　参考文献　码１　８７位的天冬酰胺。　Ｂａｈｎ　ＲＳ，Ｄｕｔｔｏｎ　Ｃｂｌ，Ｈｅｕｆｅｌｄｅｌ　ＡＥ三、讨论　，ｅｌ　ａｌ　Ａ　ｇｅｎｌＪ，ｎｉｃ【　“ｒ　ｎｍｔｍ％ｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅＸｌＴａｇｅｌｌｕ￣ａＴ　ｄｏｍａｉｎ　仆ｅ　ｔｈｙｎｎＹｇｐｌｒ…：ｕｐｔｏ　ｎ　ＴⅥ　ＧＤ患者体内可有多种针对甲状腺成分的抗体，其中以　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　Ｃ￣ｖｅｓ　ｏｐｈｔｈａｌｍｏｐａｔｈｙ』Ｃ“ｎ　Ｅｌ￣ｄｏｏｉｎｏｌ　Ｍｅｌａｂ　ＴＩＬ￣．ｂ最为重要，它结合到甲状腺细胞膜的ＴＳＨＲ上引起甲　ｌ９９４．２８　２５６－２６０　２　Ｎａｇａｙａｍａ　Ｙ．Ｋａｕｆｍ￣ｍ　ＫＤ．Ｓｅｔｏ　Ｐ状腺增生致甲状腺激素产生和分泌过多。尽管目前已经明　．ｅＬ　ａｌ　Ｍｏｌｅｍａｌａｌ　ｃｌｏｎｈｌｇ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　１ｈ　ｃＤ　Ａ＾Ｊ『１　ｈｕ…ｄｎ　确ＧＤ患者存在着自身免疫异常，但导致自身免疫异常的始　ｔｈ｝￣ｔｍｐｉｎ　ｍｃｅｐｔｏｒ．Ｂｉ￣ｈｅｍ　ｐｈｙｓ　Ｃ￣ｍｍｕｎ　Ｉ　９８９　Ｌ６５　动环节仍不清楚。Ｂａｈｎ等。。研究发现．ＧＤ合并重症眼病及　１ｔ８４一】ｔ９０　３　Ｎ％ｍｈｉ　Ｍ．１　０　ｔ　Ｈ．Ｍｇｅｌ　Ｍ　ｅｔ　ａｌ　Ｃｌ　ｃｍｉｎｇ．ｓｅｑｕｅ￣，ｅｉｌｔｇ　ｌ　ｌ１　胫前皮肤病变者，其ＴＳＨ受体胞外段基因第…外显子上编　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　Ｉ＇ＳＨ￣ｃｅｐｔｏｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　ＪｔＭｐｈｙｓ　Ｉ／ｃｓ　ｔⅢ…ｍ　码第５２位氪基酸的密码子有突变，从而使第５２位的脯氮酸　ｔ９９０．ｔ６６　３９４４０３　被苏氮酸置换（Ｐｒｏ５２Ｔｈｒ），他们认为ＴＳＩｔ受体的这一突变使　４　Ｋａｃｚｕｒ　Ｖ．ＳｚＭａｉ　Ｃ，Ｆａｌｕｓ　Ａ，ｅｔ　ａｔ．ｐｏｔｙｍｏｒｐｈ￣ｓｍ　ｏｆ　ｔｈｅ　５２　ｔｉｒｐｌｅｔ　ｇｅｎｅ（ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　２５３）ｏｆ　ｔｈｅ　Ｉ＇ＳＨ　ｐｔｏｒ　ｉｎ　Ｂ…ｄｏ…Ｇｍ　ｓ　其产生了免疫ｌ礞眭，其他作者也发表了类似的研究结果。　ｔｍｔｉｅｎｔｓ　ａｎｄｉｎ　ｈｅａｌｔｈｙ　ｅｏｎｌｒｏｔｓ　０　Ｈｅｔｉｌ　１９９７．１３８．１６２５　１６２８　为了进一步探究ＴＳＨ受体基因突变与ＧＤ发病之间的　５　Ｓｉｍａｎａｎｅｎ　Ｊ．Ｋｉｎｃｈ　Ａ，Ｗｅｓｔｅｎｎａ￣ｋ　Ｋ．ｅｔ　ａｌ　Ａｎａｌｙｓｉｓ【１Ｆ　ｔｎｕｔ　ｔｉ‘ｍ　关系　本研究设计了４对套叠引物对ＴＳＨ受体胞外段全段　ｉｎ　ｅｘｏＨ　ｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈｕｍａｎ　ｔｈｙｘ￣ｔｍｐｉｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｇ…ｈｉ　ｆｒｅ　ｌｕｅｎｕｙ　ｌ　ｔｈｅ　Ｄ３６Ｈ　ａｎｄ　Ｐ５２ｑ　ｐｏ［ｙｍｏｐｐｈｉｅ￣ａＴｉａｎｔｓ　ｌｈｙｍｔｄ　１９９９．９：７　１Ｉ　基因进行了筛查，结果发现ＧＤ组及对照组ＴＳＨ受体６６１位　（　妍高【Ｉ期：２００ｌ　）：４Ｊ２　点均存在Ｔ和Ｃ两种碱基．其余位点未发现异常。根据　・ｔ卜告・　汪恕萍教授逝世　中华内分越代谢杂志编委，重庆医科大学附属第一医院内分泌科教授、博士生导师汪恕萍教授因病于２００９＿年３月１　７　不幸逝世．享年６７岁。　汪恕萍教授生前十分关心和支持本刊，为本刊审稿付出了辛勤的劳动，我们对她的逝世表示深切的哀悼　中华内分泌代谢杂志编委会、编辑部